Hur Extrahera DNA från växtblad

har växt organiskt material som består av många celler , som var och en innehåller DNA som håller instruktionerna för tillväxt och funktion . Forskarna kanske vill studera hela eller delar av det genetiska material som finns i cellerna , och så behöver säkert extrahera DNA från konstruktionsmaterial och cell maskiner som omger it.Things Du behöver
2 gram lämnar
mortel
Centrifug
Vattenbad
Balans
ostduk
Sex 15ml Centrifugrör
En 1,5 ml Eppendorf-rör
100ml CTAB Extraction buffert
2 ml Beta - merkaptoetanol
7ml 24 : 1 kloroform: isoamylalkohol blandning
50 mikroliter RNAs A i en koncentration av 10 mg /ml
Pipetter
6ml isopropanol
2 ml 70 % etanol
1 mL sterilt avjoniserat vatten

Visa fler Instruktioner
1

Fyll vattenbadet till den rekommenderade nivån med vatten , som varierar med varje tillverkarens specifikationer , och slå på den. Ställ in vattenbadet till 65 grader och låt den komma upp i temperatur . Placera isopropanol behållaren på is . Ställ centrifug vid 3000 varv per minut vid en temperatur på 20 grader Celsius.
2

Väg 2 g blad på en balans och placera dem i en mortel. Lägg tillräckligt med beta - merkaptoetanol via pipett till en behållare extraktionsbuffert så den slutliga produkten består av en till två procent av beta- merkaptoetanol . Till exempel, om du har en volym buffert som mäter ungefär 100 ml , tillsätt sedan 2 ml beta - merkaptoetanol till behållaren och blanda väl .
3

pipett 7 ml extraktionsbuffert in i murbruket . Krossa blandningen till en homogen vätska med mortelstöten .
4

Vik en bit ostduk över att bilda fyra lager . Sila och pressa vätskan genom lagren i en 15 - ml centrifugrör .
5

Placera röret i vattenbad för 30to 60 min nuter . Snurra röret för att blanda innehållet varje kvart . Låt röret svalna till rumstemperatur efter hela tiden är upp .
6

Fyll röret med kloroform och isoamylalkohol blandning ( detta innehåller 24 delar kloroform till en del isoamylalkohol ) , så att rör innehåller ungefär hälften provet och hälften den nya flytande tillägg . Cap röret och vänd den upp och ner några gånger långsamt så vätskeblandningar.
7

Placera röret i centrifugen och låt det snurra i 10 minuter .
8

Placera 50 ml RNAse A i en ny centrifugrör . Pipettera supernatanten ( den klart skikt vid toppen av röret ovanför ett vitt skikt av skräp ) i det första röret och flytta den till det andra röret . Cap röret och invertera den några gånger för att blanda innehållet tillsammans. Håll röret i rumstemperatur i en timme .
9

Utför steg 6 och 7 om igen två gånger så att du har en klar provrör . Pipettera sedan upp till 9 ml av den klara vätskan från det slutliga röret i ett nytt rör. Lägg 6 ml isopropanol och invertera rören tio gånger på ett skonsamt sätt, så DNA faller ut ur lösningen och in i en fast form. Centrifugera sedan röret i 10 minuter, vilket skulle skapa en pellet av DNA i botten av röret .
10

Häll av vätskan i röret så pelleten återstår. Pipettera i 2 ml 70 % etanol och plats tillbaka i centrifugen för fem minuter. Häll av den flytande delen igen . Använd en steril pipettspets för att plocka upp pelleten och flytta det till ett sterilt 1,5 ml Eppendorf-rör. Pipettera i 200 mikroliter sterilt avjoniserat vatten och låt det DNA upplöses helt i vätskan, som kan ta över natten. Provet är sedan klar för analys. Addera