Hur man odlar en parasitens Apicoplast celler i en kultur

Apicoplasts är en typ av intracellulär organell som finns i encelliga parasiter som orsakar allvarliga sjukdomar som malaria , toxoplasmos och koccidios . Organeller är komplexa strukturer i en cell som inte kan växa och föröka sig av sig själva . De uppstod när en förfader av parasiterna uppslukas en annan organism , vilket troligen var relaterat till rödalger . Eftersom apicoplasts är inte oberoende celler , kan de inte odlas i en kultur av sig själva. Att växa dem man behöver för att växa parasiterna . Nedan följer instruktioner till kultur röda blodkroppar skede av Plasmodium falciparum , som orsakar malaria.Things du behöver
Parasit lager
RPMI1640 odlingsmedium
laminärt flöde huva
Autoklav
Albumax II serum substitut
D - glukos
Hypoxantine
HEPES
Gentamicinsulfat
Kultur kolvar
cell inkubator
Röda blodkroppar
Visa fler Instruktioner
odling av Plasmodium falciparum
en

Ställ cellinkubator till 37 grader Celsius och justera gaskomposition till en procent syre, 3 procent koldioxid, och 96 procent kväve.
2

Autoklav alla icke - steril utrustning och material Addera 3

Arbeta i laminärt flöde huva för att bibehålla sterilitet , förbereda det slutliga mediet genom att lägga till följande i RPMI 1640 odlingsmedium :

D-glukos till en slutlig koncentration av 20 mM.

Hypoxantine till en slutlig koncentration av 0,2 mM.

HEPES till en slutlig koncentration av 25 mM.

Gentamicinsulfat till en slutkoncentration av 25 mg /L.

Albumax II till en slutlig koncentration av 0,5 procent vikt /volym
4

Fördela den totala mängden av mediet gjordes i föregående steg in i så många odlingsflaskor som önskat och placera dem på shaker i inkubatorn .
5

När mediet har nått 37 grader Celsius , lägga parasiten lager .
6

Ändra odlingsmediet varje dag för att hålla parasiter väl utfodras och levande .
7

Lägg till röda blodkropparvarannan dag . De kommer att smittas av den nya parasiter som genereras i kulturen . Om de blir för många för en kolv , dela upp innehållet i två eller flera ytterligare sådana. Addera